ELISA, Western blot, PCR...

angusj 12.06.05, 13:53

Szukajac odpowiedzi na pytanie jak uzyskac wiarygodne wyniki badan trafilem
na prace opisujaca badania zrobione w Polsce (PZH Warszawa), porownujaca
metody diagnostyczne ELISA, western blot, PCR, hodowla.

www.springer.at/periodicals/fulltxt/00435325/full_2002_114_13_601.pdf
wnioski w skrocie

------
Nie znaleziono korelacji miedzy poziomem przeciwcial(ELISA), a iloscia paskow
w Western blot.
Pacjenci u ktorych wykryto zywe bakterie mieli niskie badz "negatywne"
poziomy przeciwcial.

W zwiazku z powyzszym zaleca sie wykorzystywanie wszystkich dostepnych metod
diagnostycznych, bo dla kazdego inna z metod moze byc lepsza.

------
Wykazano rowniez, ze niski i niewykrywalny poziom przeciwcial moze byc
spowodowany tworzacymi sie ich kompleksami (ktore wykryto u 30% badanych),
szczegolnie gdy przeciwcial jest nadmiar i jest to znak aktywnej choroby.

Mysle, ze wazne jest aby badana probka krwi nie byla zbyt dlugo przechowywana
(zwieksza to szanse na laczenie sie przeciwcial w kompleksy), a najlepiej
gdyby badanie bylo wykonane zaraz po pobraniu. Specjalistyczne laby
(np.Igenex) stosuja prawdopodobnie jakies zabiegi rozbijania tych kompleksow.

------
Zeby poprawic dokladnosc testow rekomenduje sie dwu poziomowa procedure
testowa. Pozytywne i watpliwe ELISy, testuje sie western blotem. Jednakze
zwiekszona swoistosc, przewidywana przy dwupoziomowym testowaniu zalezy od
uzytych zestawow ELISy i WB. Inaczej mowiac czy odpowiedni poziom swoistosci
jest uzyskany w pojedynczym tescie czy ich kombinacji zalezy od wyboru
antygenow uzytych w ELISie i genotypow borrelii uzytych do produkcji paskow
western blota.

Czyli wyniki moga zalezec od uzytego testu. Test EUROIMMUN (stosowany w 3
znanych labach ktore robia WB), ktory zawiera antygeny tylko b.afzelii moze
miec swoj udzial w falszywie ujemnych wynikach. Jak na razie EUROIMMUN
jest "monopolista" na polskim rynku (miejmy nadzieje, ze to mimo wszystko
dobry test). W omawianym badaniu stosowany byl test MILENIA prod. niemieckiej
(www.dpcweb.com/)

Wciaz poszukuje labu, ktory wykorzystuje test innego producenta.

------
Testy serologiczne wykorzystujace cale komorki borrelii lub ich
wyekstrachowane bialka powierzchniowe jako zrodlo antygenow sa trudne w
standaryzacji i optymalizacji swoistosci i czulosci. Odkryto, ze testy z
rekombinowanymi antygenami wykrywaja przeciwciala znaczaco lepiej zarowno we
wczesnych jak i poznych stadiach boreliozy.

Znowu potwierdzenie, ze w poznych stadiach boreliozy istotny jest dobor
testu. Dodam, ze w znanych mi dwoch labach wykonuja ELISe BIOMEDICA
www.bmgrp.com/ (ten sam byl uzyty w w/w badaniu), w ktorej stosowane
sa rekombinowane antygeny.

Obserwuj wątek

Drzewko
Od najstarszego
Od najnowszego

artur737 Re: ELISA, Western blot, PCR... 13.06.05, 12:42

Z badaniami laboratoryjnymi na borelioze istnieja ogromne problemy metodologiczne i interpretacyjne i niewiele mozna na to poradzic.

Wg Dr. Burrascano nastepujace prazki WB maja znaczenie w diagnostyce Bb:
18, 21-24, 31, 34, 37, 39, 83, 93. Obecnosc prazka 41 swiadczy o przeciwcialach na kretki tak bardziej ogolnie i moga to byc inne kretki (czyli nie borelioza). Ale mowa tu oczywiscie o szczepach amerykanskich i rozpatrywane badania sa zwykle w wykonaniu laboratorium Igenexu lub Bowenu, ktore wykonywane sa w ich wlasny specyficzny sposob.

Diagnoza kliniczna oraz odpowiedz na leczenie ma ciagle absolutny priorytet.
Przypomne jeszcze raz, ze jak na dzisiaj wszystkie badania laboratoryjne graja jak na razie tylko role pomocnicza w diagnozie.
- freshka Re: ELISA, Western blot, PCR... 13.06.05, 19:07
  
  Prazek 41 odpowiada Ag flagelliny. Jest to bialko zwiazane bodajze z wicia i
  wystepuje u wszystkich kretkow (niepatogennych rowniez) oraz np. u Helicobacter
  pylori - dlatego moga wystapic reakcje krzyzowe i niespecyficzne.
  - artur737 Wyjasnienie innych prazkow WB 14.06.05, 22:01
    
    18: bialko z powierzchni komorki bakteryjnej
    22: inny wariant bialka z powierzchni komorki bakteryjnej
    23-25: bialko powierzchowne C
    28: bialko powierzchowne
    30: wariant bialka powierzchownego - bialko A
    31: bialko powierzchowne typu A
    34: bialko powierzchowne typu B
    37: nieznane ale zwiazane z obecnoscia Bb
    39: Nieznane, ale bardzo specyficzne dla Bb
    41: Flagella lub ogon - jak podane w poscie wyzej
    45: Heat shock protein - pomaga przezyc goraczke u chorego.
    58: Heat shock protein.
    66: Heat shock protein. Bardzo typowe dla Bb
    73: Heat shock protein.
    83: DNA z Borrelii
    93: DNA z Borrelii
- artur737 Re: ELISA, Western blot, PCR... 14.06.05, 22:10
  
  Inny lekarz, ktorego znam (z USA) i ktory posiada ogromne doswiadczenie w leczeniu boreliozy za wazne uwaza nastepujace prazki: 18, 22, 23-25, 28, 30, 31, 34, 37, 39, 41, 83 i 93. Sa tu drobne roznice miedzy jego pogladami a pogladami Dr. Burrascano.
  
  Tenze lekarz zaleca by zawsze robic badania w laboratoriach majacych wiecej doswiadczenia w testach WB na borelioze. Wg niego mozna zwiekszyc szanse na pozytywny rezultat WB poprzez miesieczne leczenie tetracyklina i potem od razu 2 tygodniach przerwy bez antybiotyku. Zaleca by krew byla dostarczona do laboratorium jak najszybciej i ulegla natychmiastowej obrobce. Czyli laboratorium nie powinno mrozic i gromadzic osocza i czekac az im sie bedzie oplacilo wlaczyc maszyne.
  
  Proponuje wiec by skontaktowac laboratorium telefonicznie, zorientowac sie kiedy planuja przerob osocza i wyslac im swoja probke tuz przed tym by uniknac oczekiwania i mrozenia.
  - artur737 Re: ELISA, Western blot, PCR... 15.06.05, 22:39
    
    Z wyjatkiem prazka 41, ktory jest malo specyficzny to do rozpozpoznania boreliozy wystarczy jeden prazek choc beda lekarze, dla ktorych to za malo. Ogolnie jest tak, ze im wiecej prazkow tym pewniejsze rozpoznanie. Trzy prazki to juz naprawde spora pewnosc a 5 prazkow to borelioza nie do podwazenia.

Najnowsze z forum Borelioza

Zaloguj się