coś o proszkach do prania

[Gość: zuzka]

Jak należy zaproponować procedurę enzymatycznego proszku do prania, który
będzie działał w temp. 100 stopni ??????
Jeśli ktoś wie coś na ten temat to właśnie tego szukam.

enzymy 100stC i 4stC

[Gość: scept89]

bardzo metnie piszesz -> co to jest "procedura proszku"?

Jesli chodzi Ci o enzymy (glownie lipazy i proteazy) tnace w wysokich
temperaturach to oczywisci musisz pogrezbac w extremophiles organizmow zyjacych
w super-wysokich temperaturach.
Wrzuc "extremophiles hot-vent" na google albo
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed
i czytaj...

Tyle ze sam projekt jest cokolwiek niepraktyczny -> lepiej znalesc enzymy co to
w zimnej wodzie dzialaja jak trzeba. Tyle ze ktos juz opatentowal enzymy z
bakterii rozkladajacych tluszcz z kosci zdechlych wielorybow ;-)

[Gość: zuza]

Pisząc "procecura" mam na myśli kolejne etapy by taki proszek powstał. Juz
troche szukałam i trzeba zacząć od wyizolowania enzymu. Mnie interesują
działaące w temp. 100 stopni więc są one wyizolowane z hypertermofili. Potem
chyba trzeba bakterie ???odwirować???. A teraz to juz nie wiem co dalej...

przepis na proszek

[scept89]

Najpierw to trzeba takowe bakterie znalesc... Tak jak pisalem poprzednio, nie
jest to proste (hydrotermal vents zwykle wystepuja w glebokich wodach i aby je
badac potrzeba batyskafow/podwodnych robotow etc.). Gejzery zwykle maja nieco
nizsza temperature niz 100stC (mowie o temp. w ktorych zyja bakterie a nie temp.
zbiornika gejzeru pod cisnieniem).

Zalozmy ze ATCC (bank bakterii i tkanek zawiera takowe):
- zakup szczepu
- hodowla (diablo trudne dla takowych gatunkow)
- wyizolowanie DNA (lub jego zakup)
- proba wyszukania odcinka DNA kodujacego np. lipaze (hybrydyzacja albo PCR)
- sklonowanie w/w odcinka DNA w plazmid i wstawienie go w cos co rosnie w
przystepniejszych warunkach, zwykle E.coli
- plazmid powinien byc indukowalny, to znaczy np po IPTG produkowac bialko
wklonowane w plamid oraz zawierac starter pozwalajacy oczyscic bialko na
kolumnie chromatograficznej

- hodujemy bakterie, zamrazamy fiolke w glicerynie (stock)
- powielenie plazmidu/preparacja -> odkladamy DNA na bok
- hodujemy bakterie na bialko,
- preparujemy bialko (mieszanina)
- przepuszczamy to przez kolumne z Ni, sprawdzamy na 2D protein gel ze istotnie
intersujace nas bialko/enzym jest produkowane przez E.coli (dodatkowy
pasek/plama na zelu

- obmyslamy jakis test pokazujacy iz produkowane przez nas bialko dalej jest
funkcjonalne (np. gotujemy nasze bialko sprawdzamy czy takowa zupa dalej
wlasnosci lipazy zachowuje choc zapewne jest to bardziej wyrafinowane)

Tym wszystkim (z pewnymi dodatkowymi modyfikacjami) zajmuje sie firma tuz obok:
Diversa. Oni zamiast jednej termofilnej bakterii pakuja genomy setek
gatunkow/enviromental samples w plazmidy po czym wychwytuja wszystkie kolonie
wykazujace wlasnosci lipazy. dalej sekwencjonowanie, porownywanie aktywnosci,
modyfikacjie, wszczepianie w E.coli albo inne laboratoryjne bydelko, produkcja
enzymu.

[Gość: zuzka]

ok., WIELKIE dzięki, na pewno z tego skorzystam.
Pozdrawiam ;)